死滅しちまったい… 秀潤社と羊土社の本

朝実験室に行き､飼っている細胞が順調かなーと鼻歌交じりに顕微鏡を覗くと…あぁみんな死んでいる｡何故だー｡昨日元気だったのに…｡

細胞たちは普通､標準液体培地に牛胎児の血清と抗生剤を添加したもので培養し､培養中はCO2濃度を5%､温度を37度に保ったCO2インキュベーターという中に入れておく｡
細胞は､細菌やカビに弱いのでそういうものの増殖がないように(コンタミを防ぐという)清潔操作が必要｡
この清潔操作に問題が生じ､コンタミすると細胞は死滅してしまう…のだが､今回はどうもコンタミのせいではなさそう｡そういう雰囲気ではないのだ｡印象としては､培地に添加した血清のせいではないだろうか｡
というわけで､新しい血清を使って改めて培地を作ったりする一日だった｡

ところで､何故細胞を飼っているのかというと､それはルシフェラーゼアッセイのため｡
遺伝子の蛋白をコードしているエクソンの上流域には､mRNAへの転写を開始させるプロモーターと呼ばれる蛋白群が結合するプロモーター領域がある｡そのプロモーター領域の活性を調べる手法の1つにルシフェラーゼアッセイというものがあったりする｡

プロモーター領域にある塩基置換がどの程度プロモーター活性に影響するのか､というのを調べるのだが､そのためにはいくつかのステップがある｡

①DNAからプロモーター領域を制限酵素で切り出す｡
②蛍の発光蛋白ルシフェラーゼの遺伝子を組み込んだ環状DNA(ベクタープラスミド)のクローニングサイトを制限酵素で切る｡
③①で切り出したDNAを②のクローニングサイトに挿入する(ライゲーション)｡
④ライゲーションしたプラスミドを細胞に振りかけて感染させる｡
⑤プラスミドに感染した細胞はルシフェラーゼを発現させる｡
⑥その活性レベルをルミノメーターという計測機械で測る→塩基置換によってこの活性が変化するのがわかる｡

あーあ､実験を進めるのも時間がかかりそうだ｡
一緒に実験をやっている先生のお言葉｡
｢愛情不足です｡愛情を添加してください｡5ccくらいでいいです｡｣

ちなみに細胞はこんな所から買ったりする｡
http://www.atcc.org/
http://www.brc.riken.jp/

細胞を飼うために参考にしている本は､研究者なら誰でも持っているこの本｡

バイオ実験イラストレイテッド〈6〉すくすく育て細胞培養 (目で見る実験ノートシリーズ)

遺伝子関連実験も､この秀潤社のシリーズが参考になるが､最近のお気に入りはこの本｡

遺伝子工学実験ノート〈上〉DNAを得る―取扱いの基本と抽出・精製・分離 (無敵のバイオテクニカルシリーズ)

遺伝子工学実験ノート〈下〉遺伝子の解析―シークエンスからマイクロアレイまで (無敵のバイオテクニカルシリーズ)